Получение трансгенных растений картофеля, экспрессирующих ген лактоферрина человека, и анализ их устойчивости к фитопатогенам

Simple item page
dc.contributor.authorБузиашвили, А.
dc.contributor.authorЧередниченко, Л.
dc.contributor.authorКропивко, С.
dc.contributor.authorЕмец, Алла
dc.contributor.authorБлюм, Ярослав
dc.date.accessioned2021-02-03T14:16:02Z
dc.date.available2021-02-03T14:16:02Z
dc.date.issued2020
dc.description.abstractС помощью Agmbacterium-опосредованной трансформации осуществлен перенос гена лактоферрина человека (hLf) в геном ряда сортов картофеля (Solanum tuberosum) украинской селекции (Вернисаж, Левада, Свитанок Киевский и Зарево). Для этого использовали плазмидный вектор pBIN35LF, несущий ген hLf под контролем 35S промотора вируса мозаики цветной капусты и терминатора октопинсинтазы, а также селективный маркерный ген неомицинфосфотрансферазы II (nptll), обеспечивающий ус- тойчивость к канамицину. В результате селекции были отобраны 44 линии сорта Вернисаж, 26 линий сорта Левада, 25 линий сорта Свитанок Киевский и 16 линий сорта Зарево, устойчивых к 100 мг/л канамицину. Интеграция целевого гена в геном картофеля была подтверждена с помощью полимеразной цепной реакции с использованием специфических праймеров к гену hLf. Идентификацию рекомбинатного лактоферрина в тканях трансгенных линий проводили с помощью Вестерн блоттинга с использованием специфических моноклональных антител к лактоферрину. Отобранные трансгенные линии картофеля были протестированы на устойчивость к бактериальным и грибному фитопатогенам. С помощью теста диффузии в агар установлено, что сок трансгенных линий картофеля обладает антибактериальным эффектом по отношению к таким фитопатогенным бактериям, как Ralstonia solanacearum (возбудитель бактериальной гнили картофеля) и Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (возбудитель кольцевой гнили картофеля). Устойчивость трансгенных растений картофеля к фитофторозу изучали путем заражения растений in vitro изолятом Phytophthora infestans. В результате была установлена повышенная устойчивость в проанализированных трансгенных линиях картофеля к Р. infestans по сравнению с контролем. Таким образом, полученные данные показывают, что перенос гена hLf в растения картофеля повышает их устойчивость к бактериальным и грибным патогенам.ru_RU
dc.description.abstractThe transfer of human lactoferrin gene was carried out into genomes of a number of potato (Solanum tuberosum) varieties of Ukrainian selection with the use of Agrobacterium-mediated transformation. For this, the plasmid vector pBIN35LF was used carrying human lactoferrin gene hLf controlled by 35S promoter of Cauliflower mosaic virus (CaMV35S) and octopine synthase terminator, and a selective marker gene neo-mycinephpsphotransferase II conferring the resistance to kanamycin was used. As a result of selection, 44 lines of Vernisage cultivar, 26 lines of cv. Levada, 25 lines of cv. Svitanok Kyivskyi and 16 lines of cv. Zarevo resistant to 100 mg/1 of kanamycin were obtained. PCR and Western blot analyses of transformed lines with specific primers to hLf gene and a monoclonal antibody against lactoferrin were performed to confirm the transgenic nature of selected tomato plants and hLf gene expression. The selected transgenic potato lines were tested on the resistance to bacterial and fungal phytopathogens. With the use of agar diffusion assay, the antibacterial effect of the juice of transgenic potato lines was established against phytopathogenic bacteria Ralstonia solanacearum (causing potato brown rot) and Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (causing potato ring rot) was found. The resistance of transgenic potato plants to late blight was investigated by in vitro infection of plants with Phytophthora infestans isolate. As a result, the enhanced resistance to P. infestans of obtained transgenic potato lines was established compared to control. Thus, the obtained data show that transfer of hL f gene into potato genome enhance potato resistance to bacterial and fungal pathogens.en_US
dc.description.abstractЗа використання Agrobacterium-on осередкованої трансформації було здійснено перенесення гена лактоферина людини в геном ряда сортів картоплі (,Solanum tuberosum) української селекції (Вернісаж, Левада, Світанок Київський та Зарево). Для цього використовували плазмідний вектор pBIN35LF, який ніс ген лактоферина людини h L f під контролем 35S промотора віруса мозаїки цвітної капусти та термінатора октопінсинтази, а також селективний маркерний ген неоміцинфосфотрансферази II (nptLL), що забезпечує стійкість до канаміцина. В результаті селекції були відібрані 44 лінії сорта Вернісаж, 26 ліній сорта Левада, 25 ліній сорта Світанок Київський та 16 ліній сорта Зарево, стійких до 100 мг/л канаміцина. Інтеграція цільового гена в геном картоплі була підтверджена за допомогою метода полімеразної ланцюгової реакції за використання специфічних праймерів до гена hLf. Ідентифікацію рекомбінатного лактоферина в тканинах трансгенних ліній проводили за допомогою Вестерн блоттинга за використання специфічних моноклональних антитіл проти лактоферину. Відібрані трансгенні лінії картоплі були протестовані на стійкість до бактеріальних та грибних фітопатогенів. За допомогою теста дифузії в агар було встановлено, що сік трансгенних ліній картоплі володіє антибактеріальним ефектом по відношенню до таких фітопатогенних бактерій, як Ralstonia solanacearum (збудник бактеріальної гнилі картоплі) та Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (збудник кільцевої гнилі картоплі). Стійкість трансгенних ліній картоплі до фітофторозу досліджували шляхом зараження рослин in vitro ізолятом Phytophthora infestans. У результаті було встановлено підвищену стійкість у проаналізованих трансгенних лініях картоплі до Р. infestans у порівнянні з контролем. Таким чином, отримані дані вказують на те, що перенос гена hLf в геном картоплі підвищує її стійкість до бактеріальних та грибних патогенів.uk_UA
dc.identifier.citationПолучение трансгенных растений картофеля, экспрессирующих ген лактоферрина человека, и анализ их устойчивости к фитопатогенам / А. Бузиашвили, Л. Чередниченко, С. Кропивко, Я. Б. Блюм, А. Емец // Цитология и генетика. - 2020. - Т. 54, № 3. - С. 3-15.ru_RU
dc.identifier.issn0564-3783
dc.identifier.urihttps://ekmair.ukma.edu.ua/handle/123456789/19396
dc.language.isoruuk_UA
dc.relation.sourceЦитология и генетика.ru_RU
dc.statusfirst publisheduk_UA
dc.subjectген лактоферрина человекаru_RU
dc.subjectгенетическая трансформацияru_RU
dc.subjectSolanum tuberosumru_RU
dc.subjectClavibacter michiganensis subsp. sepedonicusru_RU
dc.subjectRalstonia solanacearumru_RU
dc.subjectPhytophthora infestansru_RU
dc.subjectстатьяru_RU
dc.titleПолучение трансгенных растений картофеля, экспрессирующих ген лактоферрина человека, и анализ их устойчивости к фитопатогенамru_RU
dc.title.alternativeObtaining of Transgenic Potato Plants Expressing Human Lactoferrin Gene and Analysis of their Resistance to Phytopathogensen_US
dc.title.alternativeОтримання трансгенних рослин картоплі, що експресують ген лактоферину людини, та аналіз їх стійкості до фітопатогенівuk_UA
dc.typeArticleuk_UA
Files
Original bundle
Now showing 1 - 1 of 1
Thumbnail Image
Name:
Polucheniye_transgennykh_rasteniy_kartofelya.pdf
Size:
1.15 MB
Format:
Adobe Portable Document Format
Description:
Download
License bundle
Now showing 1 - 1 of 1
No Thumbnail Available
Name:
license.txt
Size:
7.54 KB
Format:
Item-specific license agreed upon to submission
Description:
Download
Collections
Кафедра лабораторної діагностики біологічних систем