Диференціювання індукованих плюрипотентних стовбурових клітин в кардіоміоцити в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та в спеціальних планшетах з мікролунками
Loading...
Date
2016
Authors
Будаш, Галина
Білько, Надія
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Щоб підвищити ефективність диференціювання індукованих плюрипотентніх клітин миші в кардіоміоцити, ми порівняли два методи отримання ембріоїдних тілець: диференціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та формування ембріоїдних тілець визначеного розміру в мікролунках AggreWeH планшет. Використовували трансгенну клітинну лінію індукованих плюрипотентних стовбурових клітин AT25. Клітини лінії експресу- вали IRES-фланкований зелений флуоресцентний білок (еGFP), під контролем кардіоспецифічного a-MHC промоутера. Для перевірки ефективності процесів диференціювання були застосовані методи проточної цитометрії та флуоресцентної мікроскопії. Диференціювання плюрипотентних стовбурових клітин у AggreWeИ планшетах без додавання факторів диференціювання виявилось більш ефективним ніж диференціювання в суспензійній культурі з постійним перемішуванням. Проте перевіривши дію дорзоморфіну, ДМСО, аскорібінової кислоти, G-CSF під час диференціювання згаданими вище методами найбільшу кількість кардіоміоцитів отримали на 11-у добу дифернці- ювання методом суспензійної культури з постійним перемішуванням з додаванням аскорбінової кислоти. Кількість GFP+ клітин становила 2,71 ± 0,07 %.
Description
In order to enhance the differentiation of induced pluripotent cells into cardiomyocytes, we compared two methods of embryoid bodies formation: differentiation in rotating suspension culture and formation of embryoid bodies from a predetermined numbers of pluripotent stem cells in microwells of AggreWell plates. We used transgenic murine induced pluripotent stem cell line AT25. Cell line expressed IRES-flanked enhanced green fluorescent protein (eGFP) under the control of cardiac alpha myosin heavy chain promoter (aMHC). We applied flow cytometry and fluorescence microscopyin order to test the efficiency of differentiation processes. Thus, differentiation of pluripotent stem cells in AggreWell plates without adding differentiation factors was more effective than differentiation in rotating suspension culture. However, we obtained the most amounts of cardiomyocytes on the 11-th day in rotating suspension culture with ascorbic acid,after we applied dorsomorfin, DMSO, ascorbic acid, G-CSF with the above-mentioned methods. The amount of GFP + cells was 2,71 ± 0,07%.
Keywords
плюрипотентні стовбурові клітини, індуковані плюрипотентні стовбурові клітини, ембріоїдні тільця, кардіоміоцити, диференціювання, pluripotent stem cells, induced pluripotent stem cells, embryoid bodies, cardiomyocytes, differentiation
Citation
Будаш Галина Володимирівна. Диференціювання індукованих плюрипотентних стовбурових клітин в кардіоміоцити в суспензійній культурі з постійним перемішуванням та в спеціальних планшетах з мікролунками / Г. В. Будаш, Н. М. Білько // Вісник Київського національного університету імені Тараса Шевченка. - 2016. - № 1 (71) : Біологія. - С. 46-50.